免疫組織化學染色和PCR檢測

MSI的標準診斷方法包括使用5個微衛星標記對腫瘤和正常組織進行PCR分析，2個用於單核苷酸重複（BAT26和BAT25），3個用於二核苷酸重複（D2S123，D5S346和D17S250），或一組5個單核苷酸標記（BAT-25，BAT-26，NR-21，NR-24和MONO-27）。

在MSI-H腫瘤中其5種標記中有2種或更多種為不穩定，而MSI-L腫瘤中則是5種標記中有1種不穩定，如果是微衛星穩定（MSS）腫瘤中則沒有任何不穩定的標記物。

使用IHC檢測MMR蛋白的hMLH1，hMSH2，hMSH6和hPMS2表達是否有缺失，可以指示功能性MMR系統的存在與否，間接確認其MSI。這些測試可以提供預後信息，特別是在2期和3期大腸直腸癌患者中，並且做為轉移性大腸直腸癌免疫治療的預測生物標誌物，用於選擇患者並預測對單藥5-FU的抗藥性，但不能預測其對Irinotecan或oxaliplatin的抗藥性。

指南如何建議??

美國臨床腫瘤學會，美國臨床病理學會，分子病理學協會和美國病理學會建議，對所有大腸直腸癌患者進行MMR / MSI檢測。臨床醫生應為大腸直腸癌患者進行MMR狀態檢測，以確定Lynch綜合症候群以及找出預後分層後之高風險患者.40

美國腫瘤學臨床實踐指南建議對所有患有大腸直腸癌病史的患者進行通用MMR或MSI檢測。在MLH1缺失的情況下、有BRAF V600E突變患者，進行排除Lynch綜合症候群的診斷。 MMR或MSI測試可以告知轉移性疾病患者是否可以使用免疫療法。

此外，第2期MSI-H大腸直腸癌患者預後屬於良好，但輔助治療不建議用5-FU。許多專家建議對所有新診斷的大腸直腸癌和子宮內膜癌患者進行MSI檢測，無論家族史如何，確定哪些患者應該對Lynch綜合症候群進行基因檢測。

免疫治療在錯配修復缺陷之轉移性的大腸直腸癌效果如何?

PD-1蛋白是在T細胞、B細胞和自然殺手細胞上表達的跨膜蛋白。 PD-1是T細胞活性的負向調節物，當其與其2個配體PD-L1和PD-L2相互作用時，會因此限制T細胞在免疫應答的各個階段的活性。PD-1在腫瘤細胞和抗原呈遞細胞中表達，並且PD-L1與T細胞的PD-1的結合，造成T細胞功能障礙及衰竭。通過維持PD-1表達產生腫瘤高度抑制免疫的微環境。

透過阻斷PD-1或PD-L1，進而會解放抗腫瘤的免疫力，並且已經證實了顯著的臨床活性。MSI-H 轉移性的大腸直腸癌的患者傾向於對常規化療反應較差，並且在免疫細胞中表現出較高水平的腫瘤新抗原，腫瘤浸潤淋巴細胞和檢查點調節劑的表達。由於這些原因，錯配修復缺陷(dMMR)與MSI-H 轉移性的大腸直腸癌患者比較可能從免疫檢查點抑製劑中獲得特別的益處。